阳性对照室建设目标是为了对照和验证微生物检测室测试的结果,主要是三个要点,第一:负压万级第二:配置生物安全柜 第三:保证一定的压力梯度,无尘车间-阳性对照室及生物安全柜,阳性对照室采用单独的空调系统,净化级别为万级,阳性对照室相对于相邻的缓冲室为负压。生物安全柜可对人员、环境、样品进行保护。
阳性对照室建设要求
1、一更的洁净度可以不做要求,我见到的大多是有送风,你们做成万级是可以的。一更内可以设洗手盆也可以设手消毒器(房间太小设洗手盆不方便)。一更内应设紫外线杀菌灯。一更对更鞋应保持正压。
2、二更的洁净度为万级,二更对一更应保持不小于10Pa的正压。二更内应设紫外线杀菌灯。
3、阳性对照室的洁净度为万级,阳性对对二更应保持相对负压。阳性对照室内应设生物安全柜(也有用垂直层流工作台的)。阳性对照室内应设紫外线杀菌灯。阳性对照室与准备间之间应设带紫外线灯的传递窗(zui好是带净化送风的传递窗)。
阴性对照(negative control)和阳性对照(positive control)是针对“预期结果”而说的。凡是肯定出现预期结果的组,为阳性对照组。凡是肯定不会出现预期结果的组,为阴性对照组。
阴性对照的目的是排除假阳性,阴性对照就是一个确定肯定已知是阴性的东西,如果结果出来这个样本显示阳性了,说明你的实验有问题。
而阳性对照的目的是排除假阴性。阳性对照就是一个确定肯定已知是阳性的东西,如果结果出来这个样本测不出阳性反应,说明你的实验有问题。空白有的时候可以当作是一种阴性对照,空白的特别意义在于测定实验的背景噪声。也就是说空白样本被测得到的数值,告诉你未知样本的读数当中,有多少数值是背景,多少是真实特异性的反应所得。
在细胞凋亡过程中伴随着一系列的形态特征改变,细胞膜的改变是这些特征中较早出现的一种。在凋亡细胞中,细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的外侧。Annexin-V是一种35-36 KD的钙粒子依赖的磷脂结合蛋白,它对PS具有较高的亲和力。细胞凋亡时,可以和外翻的PS结合,从而可以检测凋亡的细胞。发生死亡的细胞其细胞膜上的PS也外翻,因而也会阳性。因此,常用的凋亡试剂盒除了采用Annexin-V标记之外,还会加一种DNA染料,常用的有PI和7-AAD,由于死亡的细胞膜通透性增高,染料可以进入细胞内和DNA结合,从而可以发荧光,区分出死细胞。
在使用FAS单抗诱导前后的检测结果中,横坐标是Annexin-V FITC, 纵坐标是PI,左上、右上、左下、右下四个象限中右上象限代表死亡的细胞,左下象限是存活的细胞,右下象限是凋亡的细胞。